第一部分 糖类 9
实验一 3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖和总糖 9
实验二 蒽酮比色定糖法 12
实验三 费林(Fehling)试剂热滴定定糖法 14
实验四 SHS 碱性铜试剂法滴定还原糖 17
实验五 Somogyi 铜试剂比色法测定还原糖 22
实验六 血糖的测定 25
实验七 糖的分离鉴定——硅胶 G 薄层层析法 28
第二部分 蛋白质 35
实验一 蛋白质的基本性质 35
Ⅰ.蛋白质的两性反应和等电点的测定 35
Ⅱ.蛋白质的沉淀、变性反应 37
实验二 从牛奶中分离制备酪蛋白 41
实验三 氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法 43
实验四 乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 46
实验五 蛋白质相对分子质量(Mr)的测定——凝胶层析法 51
实验六 葡聚糖凝胶层析法分离蛋白质 62
实验七 聚丙烯酰胺凝胶电泳 65
Ⅰ.聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白 69
Ⅱ.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量(Mr) 73
Ⅲ.聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点 80
实验八 蛋白质浓度的测定 91
Ⅰ.凯氏定氮法测定蛋白质含量 91
Ⅱ.双缩脲法测定蛋白质含量 94
Ⅲ.福林-酚试剂法测定蛋白质含量 96
Ⅳ.紫外吸收法测定蛋白质含量 99
Ⅴ.考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 100
第三部分 酶 102
实验一 酶的基本性质 102
Ⅰ.酶的特性——底物专一性 102
Ⅱ.影响酶活性的因素(1)——激活剂和抑制剂 105
Ⅲ.影响酶活性的因素(2)——pH,最适 pH 测定 107
Ⅳ.影响酶活性的因素(3)——温度,最适温度测定 110
实验二 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 114
实验三 蛋白水解酶活力的测定 119
实验四 不同植物不同生长发育期蛋白质组学研究 122
Ⅰ.不同植物 SOD 提取及其同工酶的分离与活性染色 123
Ⅱ.植物不同生长发育期过氧化物酶同工酶谱分析 131
第四部分 核酸 137
实验一 核酸的提取 137
Ⅰ.肝脏 DNA 的提取 137
Ⅱ.酵母 RNA 的提取——苯酚法 140
Ⅲ.酵母 RNA 的提取——浓盐法 141
实验二 核酸含量的测定 143
Ⅰ.紫外吸收法测定核酸含量 143
Ⅱ.二苯胺显色法测定 DNA 含量 145
Ⅲ.定磷法测定 RNA 含量 146
Ⅳ.苔黑酚法测定 RNA 含量 148
实验三 质粒 DNA 的提取及鉴定 151
Ⅰ.质粒 DNA 的小批量提取 151
Ⅱ.DNA 的琼脂糖凝胶电泳 154
Ⅲ.质粒 DNA 限制性酶消化 156
实验四 植物材料基因组 DNA 多态性分析 159
Ⅰ.水稻基因组 DNA 的提取纯化 159
Ⅱ.随机扩增多态性 DNA 技术 161
Ⅲ.基因组 DNA 多态性分析 166
第五部分 维生素 169
实验一 维生素 C 的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法) 169
实验二 维生素 B1的定量测定 173
第六部分 代谢 183
实验一 生物氧化(一) 183
Ⅰ.脱氢酶的一般性质鉴定 183
Ⅱ.多酚氧化酶的性质鉴定 184
实验二 生物氧化(二) 186
Ⅰ.需氧脱氢酶的性质鉴定 186
Ⅱ.琥珀酸脱氢酶及丙二酸的抑制作用 186
实验三 脂肪酸的 β-氧化作用 189
实验四 肌糖元的酵解作用 192
实验五 血清谷丙转氨酶(SGPT)测定(King 氏法) 195
实验六 氨基移换反应及其产物的鉴定 199
前言
有识之士早就预言, 2 1世纪是生命科学的世纪。生物化学作为生命科学各分
支理论和应用学科的基石,受到越来越广泛的重视,成为生命科学中最活跃的分
支学科之一;生物化学实验技术已成为从事生命科学研究最基本的工具和手段之
一。正因如此,高等学校许多相关专业都将生物化学列为学生的专业必修课程。生
物化学实验作为把生物化学理论知识与实践相结合的桥梁,既能加深学生对生物
化学理论的理解和掌握,又能培养学生运用生物化学理论知识去分析问题、解决
问题的素质和技能,编著一本适用的实验教材显得尤为重要。正是基于这一点,在
浙江大学" 2 11工程"课程建设和改革基金以及生物学理科基地基金的资助下,我
们充分调研了国内著名高校当前生物化学实验教学的现状,在综合浙江大学华家
池校区、玉泉校区和西溪校区原有生物化学教学内容的基础上,借鉴和参考了国
内外的生物化学实验教材及专著,融合了我们自己比较成熟的科研成果,吸收和
引进了一些新实验方法和技术,编写了这本实验教材。
本书以综合性大学、师范、医药和农林水产院校相关专业的本科生为主要读
者对象,也可供生物化学工作者参考。虽然只选编了5 3个实验,但覆盖了糖类、蛋
白质、酶、核酸、维生素和动态代谢等内容,包括了生物活性物质的提取、分离、制
备、分析和鉴定的各项基本技术,尤其增加了大量附录,为同一实验项目提供了多
种可供选择的实验方法,强调了实验中的关键注意事项,分析了实验中常出现的
不正常现象的成因,并指出了相关解决措施和方法。'这为初学者做好实验提供了
有益的帮助。有些实验可串联组成一个综合性实验,而综合性实验又可分解为几
个单独实验来完成,这适宜于不同课时的课堂教学需要,同时有助于提高学生的
实验设计、综合运用、宏观思维和辩证分析问题的综合素质,达到培养科研工作能
力的目标。
本书在编写过程中得到了浙江大学生命科学学院各级领导的大力支持,在实
验预做和验证过程中得到了浙江大学生命科学学院各位同仁的大力协助o在此对
他们致以由衷的感谢。
由于时间仓促,更由于编者水平有限,书中难免存在不足之处。我们诚挚地欢
迎使用本书的师生、实验技术人员批评指正,以便重印时修订。
史锋
2002 年8 月
出版发行浙江大学出版社
(杭州浙大4 3 8 号邮政编码3 1 002 7>
(网JJI; :http://www.zjupress.eom)
责任编槐阮海潮
排版浙江大学出版社电脑排版中心
印刷德清第二印刷厂
开本7 8 7mm X 1092mm 1/16
印张1 2 . 75
字数3 1 6 千
版印次2 0 0 2 年1 0月第1 版2 002 年1 0月第1次印刷
印鼓0 0 0 1 - 3 0 0 0
书号ISBN 7-308-03025-3/Q ? 029
定价2 0 . 0 0 元